Dosage sérique de la 25 OH vitamine D - Techniques Limites Interprétation

Dosage sérique de la 25 OH vitamine D

              Techniques
                Limites
             Interprétation

25 OH D: vitamine D dosée

• Principale forme circulante de vitamine D
• Les concentrations sériques de 1,25 (OH)2 D sont 1000
  fois moins importantes que celles de 25 OH D
• 2 formes à doser chimiquement proches :

    25 OH D2                            25 OH D3

       Forme d’origine végétale donc   Forme d’origine animale donc endogène
        exclusivement thérapeutique             et /ou thérapeutique

Processus et sources d’erreur

              Conservation                                 Comparaison par rapport à une
                                                          valeur antérieure mesurée par une
         Interférence avec                                          autre méthode
            le contenant
                                                                 Seuils décisionnels

Prélèvement                  Analyse                 Résultats                         Interprétation

                               Robustesse de la méthode
                                        Biais
                                 Incertitude de mesure

Stabilité de la 25 OH D en tube

                       • Étude :Wielders JP,
                         Wijnberg FA, Clinical
                         Chemistry, 2009
                       • Bonne conservation
                         en sang total et en
                         sérum réfrigéré
                       • Réserve sur les tubes
                         avec gel séparateur:
                         à éviter.

Techniques existantes

• Chimiques:
   – HPLC
   – LC/ / MS²
• RIA: Diasorin, IDS
• ELISA: IDS
• Immunochimiluminescence CLIA
   – Diasorin
   – IDS
   – Roche Diagnostics
   – Abbott

Techniques chimiques

• Chromatographie
   – Avantage : très grande précision de mesure. Séparation des 25 OH
      D2 et 25 OH D3
   – Inconvénient : méthode complexe avec une étape d’extraction de la
      vitamine D du sérum
• Spectrométrie de masse:
   – Identification biochimique fiable et très précise
   – Appareil installé dans les laboratoires de recherche ou de
      références.
• Pas de fournisseur fournissant une technique de dosage. La méthode
  doit être mise au point et validée.
• Technique absente des LABM

Techniques RIA

• RIA : Radio immunologic assay.
• Techniques dites « chaudes », utilisant un anticorps anti-
  vitamine D.
• Technique précise
• Les seuils de décision clinique ont été établis sur la
  méthode RIA de Diasorin: test de référence actuel
• Réglementation encadrant les techniques et les locaux de
  réalisation de la RIA sont strictes pour la protection des
  manipulateurs.

Techniques CLIA et ELISA

• Techniques immunologiques « froides »
• Techniques automatisées utilisées pour d’autres paramètres
  dosables
• Grande diffusion dans les LABM
• Techniques très répandues mais différentes de la technique
  de référence….
• Quelle est la corrélation de ces méthodes par rapport à la
  RIA?

Corrélation entre les méthodes

                • Étude; suédoise: Snellman et
                  all., 2010
                • HPLC vs RIA (IDS) vs CLIA
                  (Diasorin)
                • 204 patients
                • Conclusion : pas de taux
                  comparables entre les 3
                  méthodes utilisées
                • Impact clinique significatif

Corrélation entre les méthodes

• Impact de ces 3 méthodes par rapport à un seuil décisionnel
  de 50 nmol/L

Contrôle externe

• Une autre approche à mis en lumière ce problème: l’EEQ

• DEQAS (vitamin D External Quality Assessment Scheme)

• Montre des CV importants (> 10%)

• Confirme des différences de résultats inter-méthodes

Résultat CQE inter-méthodes

Spécificité des tests immunologiques
          (RIA, CLIA, ELISA) D2 / D3

Test                         25(OH)D2                       25(OH)D3

RIA Diasorin                 100%                           100%

CLIA Diasorin                104%                           100%
Liaison
IDS RIA                      75%                            100%

IDS EIA                      75%                            100%

Roche CLIA (arrêté           < 10 %                         100%
depuis 09/2010)
Source afsspas : Recommandations à destination des biologistes concernant la spécificité
des dosages de vitamine D
Diasorin dispose de la meilleure spécificité

Vers une nouvelle méthode de référence

• Passer à une méthode de référence internationale chimique
  : LC/ MS²

• Mettre au point des étalons auxquels les fournisseurs
  pourront calibrer leur méthode et la rattacher à la méthode
  de référence.

• Travail similaire aux HbA1c

• Enfin, vérifier et/ou faire évoluer les valeurs de références
  une fois les techniques standardisées.

Requirements for 25(OH)D assays

• Choose an assay that measures both 25(OH)D2 and 25(OH)D3
• If using an assay that separates 25(OH)D2 and 25(OH)D3 (i.e.
  HPLC or LC/MS-MS) indicate the sum of the 2 compounds
  (25(OH)D2+25(OH)D3) as the main results in your results sheet
• Participate to an external quality control scheme that provides
  materials with adocumented commutability with human sera
  (e.g. the UK based DEQAS)
• An internal quality control program has to be carried out in every
  laboratory by using different levels samples and valuable criteria
  for rejecting or accepting “the analytical run”
• Do not use population-based reference values (i.e. the
  concentrations of an apparently healthy population) in addition
  to a recommended range for 25(OH)D. This is highly confusing
  for the clinician
• We recommend serum as the sample of choice. Try to avoid gel
  tubes until more data are available
• Express results in ng/mL

Serum 25(OH)D range (ng/mL)
according to the authors.

Proposed 25(OH)D   Number of experts
range
30–100             20

30–150             1

30–80              1

30-50              2

40-100             1

Attention aux changements de méthodes
       de dosage

• Le changement de technique dans le dosage de 25 OH D
  entre 2 dosages pour un même patient rend difficile
  l’interprétation des résultats
• Rester prudent sur l’interprétation en tenant compte du CV
  > 10%.
• Test en voie de standardisation internationale

• Attention nouveaux tests Abbott et Roche , pas de données
  sur ces 2 tests qui risque d’être très largement utilisés étant
  donné le nombre de LABM équipés d’appareils adaptés à
  ces techniques

Conclusion

• Vitamine D : 25 OH D un paramètre en plein essor avec
  des implications cliniques de plus en plus nombreuses

• Des techniques hétérogènes

• Suivre un patient par une même technique spécifique des 2
  formes de vitamine D