Actualités sur les nouveaux tests biologiques dans le diagnostic de l'allergie - Lorna Garnier - RFAM 4
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Actualités sur
les nouveaux tests biologiques
dans le diagnostic de l’allergie
Lorna Garnier
Françoise Bienvenu et Jacques Bienvenu
Laboratoire d’Immunologie – Dr C. Lombard
Groupement Hospitalier Sud – Hospices Civils de LyonCahier des charges d’un test idéal en Allergie?
Test rapide
Excellente valeur Choix des
prédictive positive allergènes à
et négative tester
Facile à
Robuste mettre en
oeuvre
Coût
raisonnableAutotest :
« Détection de marqueurs d’une réaction allergique »
Facile à
Coût
Test rapide + mettre en + raisonnable
oeuvreAutotest :
« Détection de marqueurs d’une réaction allergique »
Test immunochromatographique
Interprétation :
-Test positif : concentration en IgE totales supérieure à la
normale : consulter votre médecin
- Test négatif : « la concentration en anticorps IgE dans le
corps est normal , il n’y a pas de réaction allergique »
Excellente valeur Choix des
prédictive positive allergènes à
et négative testerLes différents acteurs dans les réactions
d’hypersensibilité immédiate IgE-médiées
Palomares, 2017Dosage d’IgE spécifiques
Traceur
enzymatique,
fluorescent…
Kleine-Tebbe et al, 2016Dosage d’IgE spécifiques : Tests unitaires
SIEMENS HYCOR DR.FOOKE PHADIA
IMMULITE 2000 XPi HYTEC 288 + ALLERG-O-LIQ- ImmunoCAP
Immunoassay System SYSTEM
Automates
• Manque de standardisation
• Actualités :
– Commercialisation de nouveaux allergènes moléculaires
CAP
Support Disques de cellulose membrane de
cellulose
Matrice soluble Allergènes biotinylés,
biotinylée (polymères de anti-IgE fixés sur plaques
polylysine) de microtitration
Allergènes 26 20 51 108
moléculaires (n) (majorité r) (n et r) (r et n)
Kleine-Tebbe et al, 2016Dosage d’IgE spécifiques :
Tests multiparamétriques sur un même support
CLA TAP Euroline
Eurobio/Ingen Eurobio/Ingen Euroimmun
• 30 allergènes
– Résultats semi-quantitatifs pour chaque allergène
– Principalement des extraits
– Recherche des IgE anti-CCD (TAP et Euroline)
• Techniques manuelles pouvant être automatisée
• Performances analytiques < à celles des tests unitairesTests multiparamétriques sur un même support
Immunodot, Profil respiratoire
• 101 enfants et 81 adultes
présentant une allergie respiratoire
• Immunodot Euroline Euroimmun
• Comparaison aux résultats de
l’immunoCAP
• Extraits :
– Se : 87% - Sp :88%
• Allergènes moléculaires (n=13) :
– Se : 99% - Sp : 87%
Fraia et al, CEA 2018Euroline
ImmunocapDosage d’IgE spécifiques :
Biopuces multiallergéniques
Obtention d’un grand nombre de résultats
simultanément : « Vision élargie »
Détermination d’un profil de sensibilisation
Faible quantité de sérumBiopuces multiallergéniques :
Test ISAC – Thermofisher Scientific
– 1ère biopuce commercialisée en France
– 112 allergènes moléculaires (r ou n) (provenant de
51 sources allergéniques)
– 30 µL de sérum
– Dosage semi-quantitatif : Calibration à l’aide d’un
« échantillon » standard
– Signal fluorescentBiopuces multiallergéniques :
Test ALEX – Macroarray Diagnostics
• 282 allergènes fixés sur des microbilles
• 156 extraits
• 126 allergènes moléculaires
• Dosage semi-quantitatif : calibrateurs
intégrés sur chaque biopuce
• Estimation du taux d’IgE totales
• Signal colorimétrique
• Commercialisé en France par Nephrotekwww.macroarraydx.com 14
Test ALEX : BLOCAGE des CCD
(résidus glucidiques de la broméline fixés à l‘albumine)
Test performed with CCD inhibitor
Test performed w/o CCD inhibitor
Tests réalisés sur le même sérum :
sans ou avec inhibition des CCD
15ALEX ImmunoCAP ISAC
Allergènes moléculaires 126 112
Extraits Allergéniques 156 0
Quantité protéines / spot 2 à 20 ng 50 à 200 fg
Dosage IgE totales OUI (3 à 2500 kU/L) NON
Blocage des CCD OUI NON
Volume prise essai 100 µL 30 µL
Mode de lecture Colorimétrie, amplification Fluorescence sans
enzyme amplification
Coût scanner < 5000 euros > 30 000 euros
Minimum de test(s) par run 1 4
Nombre de spot(s) par 1 3
allergène
Rajout d’allergène Aisée Très difficile
Coût du test + ++
Praticabilité du test +++ ++Comparaison des résultats des tests ISAC et ALEX
Corrélation allergène par allergène
Heffler et al. WAO Journal (2018)Performances analytiques du test ALEX :
Avantages et limites
• Sensibilité à améliorer (en comparaison à l’ISAC)
– Certaines PR-10 alimentaires (Mal d 1, Ara h 8)
– Cla h 8, Che a 1, Der f 2, Gly m 5
• Meilleure sensibilité (en comparaison à l’ISAC)
– Ara h 1 et 3, Cor a 9
– Gly m 4
– Profilines
• Meilleure spécificité (en comparaison à l’ISAC)
– Jug r 2 (blocage des CCD)
– Act d 2
• Certains allergènes manquants :
– Alpha-gal
– Can f 5
– Ana o2
– Blé,…Biopuces multiparamétriques :
Vers une amélioration des performances analytiques?
• Concept de présentation multiple d’épitope
Epitopes de l’alpha-lactalbumine: Peptide linéaire 2 peptides forme 2 peptides forme
-Peptide linéaire « branchée » « tandem »
-Répétition de 2 peptides identiques sous
forme « branchée » ou « en tandem » Intensité du signal pour les patients allergiques plus
distincte de celle des patients non allergiques
Gori et al, ACA, 2017Dosage d’IgE spécifiques :
Nanofluidique : AbioSCOPE Abionic
– 50 µL de sérum ou sang total
– Extraits allergéniques et allergènes moléculaires
– Panel personnalisable (jusqu’à 14 allergènes /capsule)
– Résultats semi-quantitatifs
– Rendu de résultat : 12 minutes pour un panel de 6 allergènes
– Seul panel disponible à l’heure actuelle : panel respiratoireNanofluidique : AbioSCOPE Abionic
Principe du test
Marki et al, Curr All Asthma Rep, 2017Nanofluidique : AbioSCOPE Abionic
Performances analytiques
• Corrélation linéaire avec les résultats obtenus sur l’Immunocap :
• de 0.7 à 100 kUA/L pour les IgE spécifiques
• de 10 à 500 kU/l pour les IgE totales
• Pas d’interférence des IgE totales jusqu’à 3200 kU/lLes différents acteurs dans les réactions
d’hypersensibilité immédiate IgE-médiées
Palomares, 2017Tests d’activation cellulaires
Test d’activation des basophiles Test d’activation mastocytaire
PN Basophiles du patient : Lignée cellulaire mastocytaire : LAD 2
Réalisation du test dans les 24 heures - provenant d’un patient ayant un
suivant le prélèvement sarcome mastocytaire
- Activation : Aggrégation of FcεRI or
FcγRI
Marqueurs d’activation : CD 203c, CD63
Sensibilisation avec IgE présentes dans le
Libération des
plasma du patient
médiateurs et
modifications du
phénotype du Marqueurs d’activation : CD63
basophile
Relargage de
médiateurs
solubles
Santos et al, JACI 2018Tests d’activation cellulaires :
Test d’activation mastocytaire (TAM)
- 73 enfants allergiques à l’arachide (PA)
- 60 enfants sensibilisés / non allergiques à l’arachide (PS)
- 41 non sensibilisés non allergiques (NA)
Sensibilité : 77% - Spécificité : 99%
PPV : 96% - NPV 83%
Santos et al, JACI 2018Tests d’activation cellulaires :
Comparaison des TAB et des TAM
Test d’activation des basophiles
Test d’activation mastocytaire
Santos et al, JACI 2018Hypersensibilité immédiate IgE médiée :
Les mécanismes de tolérance
Feuille et al. AAIR 2018Evaluation de la tolérance :
Dosage simultané des IgE et des IgG4 spécifiques?
• Biopuce : hydrogel fixé sur une lame de verre Courbe de
calibration
Bouleau
Lait
Graminées anti-IgE-Cy5 Pêche Pomme anti-IgG4-Cy3
Herbacées
Bonne corrélation (> 80% pour la majorité des allergènes) avec :
-ALLERGO-O-LIQ (Dr Fooke Laboratorien) pour les IgE spécifiques
-Specific IgG4 Elisa (Dr Fooke Laboratorien)
Feyzkhanova et al Clin Proteomic, 2017Conclusion • Pour une bonne interprétation des résultats biologiques : connaître les performances, avantages et limites de chaque test • Dialogue/intéractions clinico-biologiques • Mettre les différents outils entre les « bonnes mains » • Le dernier mot reste à la clinique • Ne pas oublier les diagnostics différentiels • Détermination de scores et/ou d’algorithme
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