Manuel de prélèvement - Laboratoire d'Anatomie Pathologique - UCL Mont-Godinne
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CHU UCL NAMUR Manuel de prélèvement Laboratoire d’Anatomie Pathologique Version 4 Ce document est la propriété du laboratoire et ne peut être reproduit en entier ou partiellement sans l’autorisation écrite du directeur du laboratoire.
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 1 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Contenu 1. OBJET ....................................................................................................................................................................3 2. DOMAINE D’APPLICATION ....................................................................................................................................3 3. DEFINITIONS – ABREVIATIONS .............................................................................................................................3 4. LOGIGRAMME – CONTENU ..................................................................................................................................3 4.1. Renseignements administratifs: ...................................................................................................................3 4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique: ........................................................7 4.3. Examen extemporané...................................................................................................................................8 4.4. Examen histologique ....................................................................................................................................8 4.5. Examen cytologique ...................................................................................................................................11 4.6. Analyses immunohistochimiques ...............................................................................................................13 4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein.......................................................................13 4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans le cancer de l’estomac (et du bas-œsophage) ...................................................................................................................15 4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies pulmonaires .....16 4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires ..................................17 4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires .................................18 4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires ................................19 4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117) ................................21 4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie ............................................................22 4.8. Analyses en biologie moléculaire ...............................................................................................................23 4.8.1 Sous-traitance au Laboratoire d’Anatomie Pathologique des Cliniques Universitaires Saint-Luc à Woluwé. 24 4.8.2 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie des Cliniques Universitaires Saint Luc à Woluwé ...26 4.8.3 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de Liège (Unilab Lg). ................................................................................................................................................27 4.8.4 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme. ..................................28 4.8.5 Sous-traitance au laboratoire de l’IPG à Gosselies. ...........................................................................35 4.9. Autopsies ....................................................................................................................................................37 5. INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES ................................................................................................................38 1
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 2 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 6. ANNEXES .............................................................................................................................................................38 2
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 3 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 1. OBJET Le manuel de prélèvement contient toutes les informations relatives aux traitements des échantillons primaires (prélèvements) ainsi qu’aux conditions de fixation et d’acheminement préconisées pour garantir un déroulement optimal des analyses. 2. DOMAINE D’APPLICATION Ce manuel est un document externe mis à la disposition des clients du SAP dans le but de fournir les informations précises concernant les processus pré-analytiques et ainsi d’obtenir les prélèvements dans des conditions optimales. 3. DEFINITIONS – ABREVIATIONS SAP : Service (laboratoire) d’Anatomie Pathologique. Prélèvement : Matériel humain confié au SAP pour réaliser une analyse anatomo-pathologique (macroscopie, cytologie, histologie, immunohistochimie, immunofluorescence, biologie moléculaire). EUS : Echo-endoscopie trans-digestive EBUS : Echo-endoscopie trans-bronchique 4. LOGIGRAMME – CONTENU 4.1. Renseignements administratifs: Laboratoire d’Anatomie Pathologique et de Cytologie du CHU UCL NAMUR Avenue du Docteur Thérasse, 1 5530 Yvoir Belgique Tél : +32 - 81.42.30.12. Fax : +32 - 81.42.30.16. Heures d’ouverture : Le laboratoire est accessible en semaine de 8H00 à 18H. 3
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 4 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Un pathologiste est toujours accessible durant les heures ouvrables pour conseiller les prescripteurs quant aux modalités de prélèvements ou au choix d’analyse à effectuer mais également pour aider à interpréter le résultat des analyses. Le laboratoire est fermé le week-end et les jours fériés. La réception des prélèvements se fait entre 8h et 16h30. Localisation : Le service d’Anatomie Pathologique (flèche rouge) se trouve dans un bâtiment non contigu à la clinique. 4
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 5 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Service d’Anatomie Pathologique Numéros de téléphone utiles : Secrétariat : 081/42-30-12 Fax : 081/42-30-16 Pathologistes : Professeur Marie-Cécile Nollevaux (Chef de Service): 5
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 6 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Secteurs d'ORL, Gynécologie et Urologie 081/42-30-11 marie-cecile.nollevaux@uclouvain.be Docteur Saro Aghazarian Secteur de Dinant 081/42-30-84 saro.aghazarian@uclouvain.be Professeur Monique Delos Secteur de Gastro-Entérologie 081/42-30-10 monique.delos@uclouvain.be Docteur Caroline Fervaille : Secteurs de Dermatologie-chirurgie plastique, Cardio-vasculaire, Hématologie et Autopsies 081/42-30-14 caroline.fervaille@uclouvain.be Docteur Claudia Stanciu-Pop : Secteurs de Cytologie, Sénologie et Pneumologie 081/42-30-34 claudia.stanciupop@uclouvain.be Types de prélèvements pris en charge par le SAP : - cytologiques - histologiques : biopsies pièces opératoires - examens extemporanés - autopsies 6
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 7 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique: Pour être accepté à l’encodage, le prélèvement doit être accompagné d’une demande d’analyse (ANN-QUAL-015) qui doit comporter les informations suivantes : 1. Identification univoque du patient, à savoir : a. Nom, prénom b. Adresse c. Date de naissance d. NISS 2. Nom, Prénom, adresse et numéro INAMI du prescripteur 3. Type et origine du prélèvement 4. Tous les échantillons sont identifiés de manière univoque 5. Date de la prescription et signature du prescripteur 6. Renseignements cliniques et exposé du problème 7. Données utiles à l’exécution des prestations et à l’interprétation des résultats, notamment : a. La date et l’heure de prélèvement et l’heure de fixation. (Ces informations permettent d’évaluer le temps de fixation, qui, pour certaines analyses, peut influencer la nature des résultats.) b. Le cas échéant, d’éventuelles difficultés lors de la réalisation du prélèvement / de sa fixation, qui pourraient influencer le résultat de l’analyse Le formulaire de demande d’analyse est disponible dans l’intranet et sur le site internet du CHU ; il ne peut en aucun cas y être apporté une modification. Le prélèvement lui-même est correctement identifié. L’encodeur du SAP a la responsabilité de vérifier la concordance des informations présentes sur la demande et le prélèvement (PR-QUAL-005). Toute discordance ou absence d’information conduit à une procédure de gestion de prélèvement non-conforme (PR-QUAL-006). Vous comprendrez aisément que certains prélèvements non-conformes aux indications reprises ci-dessus sont bloquants pour l’analyse alors que d’autres permettent l’analyse sous-réserve (ANN-QUAL-012 ; cette annexe est disponible dans l’intranet ainsi que sur le site internet du CHU). En cas de non-conformité bloquante, seule la correction des éléments manquants permettra la réalisation de l’analyse. 7
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 8 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Le compte-rendu anatomo-pathologique comportera un descriptif textuel exhaustif de toute non-conformité, afin d’en assurer la traçabilité. 4.3. Examen extemporané L’objectif d’un examen extemporané est d’orienter le chirurgien au cours de son intervention afin qu’il puisse, en fonction du résultat de l’examen extemporané, adapter et éventuellement modifier le geste chirurgical prévu. La technique histologique de cet examen est basée sur une coupe en congélation réalisée à l’aide d’un cryostat. La coupe qui en résulte est de moins bonne qualité qu’une coupe histologique classique. Le diagnostic devra donc toujours être validé par la lecture du prélèvement après fixation et enrobage en paraffine. Une fois le prélèvement reçu (frais !), il faut compter entre 15 et 45 minutes pour que puisse être transmis un résultat (le délai dépend du nombre de prélèvements extemporanés à prendre en charge au même moment). En pratique : - L’analyse est réalisée uniquement à partir de matériel frais ! Ne pas mettre de sérum physiologique ni de liquide fixateur - Acheminer le prélèvement le plus rapidement possible au laboratoire et mentionner sur le bon de demande « EXTEMPO » et le numéro de téléphone de la salle opératoire. - Le résultat est transmis par le pathologiste par téléphone dans les 45 minutes maximum sauf si un nombre important de prélèvements à réaliser en extemporané parviennent simultanément au laboratoire. - Après fixation au formol et analyse histologique classique, le résultat de l’examen extemporané sera intégré au compte rendu final et accessible après validation définitive. 4.4. Examen histologique Les prélèvements biopsiques et les pièces opératoires relèvent d’une analyse histologique, associées de façon plus ou moins extensive à une analyse macroscopique. Ces analyses nécessitent une étape initiale de fixation, permettant de prévenir l’autolyse tissulaire. Seule une fixation au formol permet la réalisation d’analyses en biologie moléculaire et de techniques immuno-histochimiques validées. Les prélèvements doivent être fixés au formol (10% tamponné – équivalent à formaldéhyde 4%). 8
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 9 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT La durée de fixation, pour les biopsies, est de minimum 2 à 6h et de maximum 48h, dans un volume de fixateur égal à au moins deux fois le volume du prélèvement ; le fixateur doit couvrir complètement le prélèvement. Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h. La durée de fixation, pour les pièces opératoires dépend de la taille du prélèvement. En général, elle est comprise entre 24 et 48h. Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h. CAS PARTICULIER : Les biopsies mammaires et pulmonaires. Ces prélèvements font fréquemment l’objet d’analyses complémentaires en biologie moléculaire. Afin de garantir la validité de ces analyses, les biopsies mammaires et pulmonaires doivent être fixées MINIMUM 6h et MAXIMUM 48h. En pratique : - Du lundi au jeudi, les biopsies mammaires et pulmonaires, fixées avant 12h, entament le jour même de leur réception par le laboratoire le cycle d’inclusion en paraffine. Si le prélèvement a été fixé après 12h, il entamera le cycle d’inclusion en paraffine le lendemain soir ; le résultat sera donc différé d’un jour. - Le vendredi, le prélèvement doit impérativement être réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard afin de pouvoir débuter le jour même le cycle d’inclusion en paraffine. Tout prélèvement du vendredi, réceptionné seulement le lundi, fera l’objet d’une non-conformité quant à la durée de fixation (sur-fixation) et les analyses en biologie moléculaire éventuellement réalisées dans un second temps seront, soit, non-contributives, soit non validées en termes d’accréditation. Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste référent du domaine. Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse histologique classique du prélèvement est transmis par téléphone le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard). L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir les comptes-rendus anatomo- pathologiques de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Monsieur Luc Toussaint. 9
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 10 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 10
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 11 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.5. Examen cytologique L’examen cytologique concerne les prélèvements qui se présentent sous forme liquide ou d’un étalement. L’examen cytologique fera appel à diverses procédures techniques, spécifiques au type d’échantillon reçu. Il est particulièrement important de veiller à l’utilisation des fixateurs et contenants adéquats afin de permettre une prise en charge optimale de l’échantillon. Si celui-ci est volumineux (ex : liquide d’ascite), seule une partie du produit est analysée. Si l’échantillon est peu abondant, tout le matériel est analysé. a. « Frottis » cervico-vaginaux Ces prélèvements sont en réalité des brossages mis en suspension (par agitation de la brossette) par le gynécologue dans un milieu liquide de préservation : Preservcyt®. Les échantillons sont ensuite traités selon la méthode ThinPrep®. Si une analyse en biologie moléculaire est nécessaire (typage HPV), le SAP utilise l’échantillon contenu dans ce même flacon, dont une partie seulement a été utilisée pour l’analyse cytologique initiale. Les disposables (brossette, flacon de Preservcyt®) sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois. b. EBUS et EUS Ces produits de ponction (et éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement) sont placés dans les tubes fournis à cet effet (tubes coniques à capuchon bleu, renfermant du Cytolyt®). Ces tubes sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). c. Liquide pleural, péritonéal Doit être confié frais au laboratoire, dès que le prélèvement est réalisé. Si le prélèvement est réalisé hors jours ouvrables, il est préférable de fixer le liquide avec de l’éthanol à 50% (non fourni par le SAP ; 1 volume d’échantillon pour 1 volume de fixateur, minimum 2 tubes). A défaut, au minimum placer l’échantillon au frigo. d. Ponctions de sein, ganglions, cavités intra-articulaires ou organes profonds Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixées à la laque, soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et bouchon bleu, renfermant le milieu Preservcyt® ou Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). e. Brossages bronchiques, pancréato-biliaires, œsophagiens 11
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 12 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Après avoir détaché la brossette qui a été utilisée pour réaliser le prélèvement, celle-ci est agitée dans le tube à fond conique et bouchon bleu contenant du Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). f. Urines Le produit des lavages vésicaux est placé dans des flacons contenant de l’éthanol à 50% (un volume d’alcool pour un volume d’urines). L’éthanol n’est pas fourni par le SAP. Le prélèvement peut également (en jours ouvrables) être apporté, dès obtention, au laboratoire. g. Liquide céphalo-rachidien (LCR) Ces prélèvements doivent parvenir frais, le plus rapidement possible, au laboratoire. A défaut, au minimum placer l’échantillon au frigo. h. Lavage bronchique Les lavages sont placés dans un flacon type biopsie (capuchon rouge) qui renferme du formol 4% pH neutre. i. Ponctions de thyroïde Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixés à la laque, soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et bouchon bleu, renfermant le milieu Cytolyt®. Ce milieu est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). En pratique, 2 types de situation se présentent : - soit nous recevons 2 lames étalées fixées à la laque et 1 tube de rinçage Cytolyt® (qui contient éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement). - soit nous recevons le produit de ponction injecté et directement rincé dans du Cytolyt®. Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste référent du domaine. Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse cytologique classique du prélèvement est transmis par téléphone le jour même ou le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h au plus tard), selon la procédure technique à mettre en œuvre pour le type d’échantillon reçu. L’examen cytologique fait l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). 12
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 13 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir le compte-rendu cytologique de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Madame Sylvie Demoulin. 4.6. Analyses immunohistochimiques La plupart des analyses immunohistochimiques sont du ressort exclusif du pathologiste qui les prescrit en fonction des nécessités diagnostiques. Certaines analyses néanmoins doivent absolument être demandées par le médecin prescripteur de l’analyse: la recherche d’expression des récepteurs aux œstrogènes et à la progestérone dans le cadre du cancer du sein, la recherche de sur-expression du récepteur HER2, dans le cadre du cancer du sein et du cancer du bas œsophage ou de l’estomac, la recherche d’expression du récepteur EGFR, dans le cadre du cancer pulmonaire non à petites cellules, la recherche d’expression de ALK dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la recherche d’expression de ROS-1 dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la recherche du récepteur c-Kit, dans le cadre des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST). 4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein L’expression des récepteurs hormonaux (récepteurs des œstrogènes et récepteur de la progestérone) sont des facteurs prédictifs quant à la réponse au traitement anti-hormonal (par ex, le tamoxifène). Ils sont recherchés systématiquement pour tout nouveau diagnostic de cancer mammaire ou après traitement adjuvant, afin de vérifier une éventuelle modification de leur statut par le traitement. La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH. Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la demande d’analyse qu’il souhaite, si l’échantillon aboutit au diagnostic de néoplasie mammaire, que soient recherchés les facteurs pronostiques/prédictifs : - Récepteurs hormonaux ER et PR - Sur-expression du récepteur HER 13
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Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 15 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents : Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11 Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans le cancer de l’estomac (et du bas-œsophage) La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH. Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la demande d’analyse qu’il souhaite, que soit recherché le statut HER2. En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. 15
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 16 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents : Professeur M. Delos, 081/42 30 10 Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies pulmonaires Dans le cadre du carcinome pulmonaire non à petites cellules est recherchée l’expression de l’EGFR, un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase, dont l’activation par le ligand, un facteur de croissance (de type EGF (Epidermal Growth Factor)) promeut la croissance tumorale. Quoiqu’il n’y ait pas d’évidence que l’expression immunohistochimique de l’EGFR comporte un caractère prédictif, en Belgique, l’accès au remboursement de la thérapie ciblée par Erlotinib (Tarceva®), en deuxième ligne, demande une positivité d’au moins 10% des cellules tumorales en immunohistochimie. Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de mutation – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés. En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10 16
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 17 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires Des réarrangements du gène ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) ont été décrits chez 3 à 5% des patients porteurs d’un carcinome pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes). Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations EGFR et KRAS et sont mis en évidence par FISH. L’analyse FISH conditionne le remboursement d’une thérapie ciblée inhibant la Kinase ALK (ex. crizotinib). L’immunohistochime ALK est considérée comme une méthode de screening pour sélectionner les patients au testing FISH. Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés. En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10 17
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 18 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires Des réarrangements du gène ROS1 ont été décrits chez 1 à 3% des patients porteurs d’un cancer pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes). Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations d’EGFR et les réarrangements de ALK. Un réarrangement de ROS1 serait associé à une réponse thérapeutique au crizotinib. L’immunohistochimie est à ce jour considérée comme un outil diagnostique potentiel permettant d’évaluer la présence de la protéine de fusion ROS1. Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés. Cette analyse est confiée en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme. Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire concernant l’analyse sus-mentionnée, issues du manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme (version 17 du 16 mai 2017) - la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée ; o ROS1 expression (IHC), suivi par FISH si positif ; - l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande ; -envoi par courrier postal possible ; Aspects pratiques : Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé. Le médecin prescripteur vérifiant la fixation adéquate du prélèvement. Les tests sont réalisés au minimum 1 fois par semaine et le délai de réponse est de 10 jours. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un compte-rendu additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Personnes de contact : Dr N. D’haene (02 555 53 91) Nicky.D.haene@erasme.ulb.ac.be Melle A. Verrellen (02 555 33 35) Audrey.Verrellen@erasme.ulb.ac.be Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : 18
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 19 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10 4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires PD-L1 est une protéine transmembranaire exprimée à la surface de certains macrophages ; elle est induite par des cytokines inflammatoires dans divers tissus. Elle se lie au récepteur PD-1, exprimé à la surface de cellules immunitaires (lymphocytes T...). En situation normale, les cellules utilisent l’interaction PD-1/PD-L1 comme mécanisme de protection contre des réactions auto-immunes en inhibant l’action des lymphocytesT. Différents types de cancers surexpriment PD-L1 (mélanome, carcinome rénal, carcinome pulmonaire non à petites cellules...) ; ils échappent ainsi à la réponse immunitaire, inhibant l’activation des lymphocytes. Dans ce cadre, l’immunothérapie devient une arme contre le cancer pulmonaire non à petites cellules. Des anticorps monoclonaux (par ex. pembrolizumab, nivolumab...) bloquent l’interaction PD-1/PD-L1, et permettent aux lymphocytes T d’être actifs, entrainant une réponse immunitaire contre les cellules tumorales. L’immunothérapie anti-PD-1 pembrolizumab a prouvé son efficacité dans le traitement du cancer pulmonaire non à petites cellules (cancer ESMO 2016), dès la 1ère ligne de traitement. L’expression de PD-L1 dans plus de 50% des cellules tumorales est associée à une meilleure réponse au pembrolizumab. Dès lors, la détection de PD-L1 au niveau des cellules tumorales est un biomarqueur pour la réponse à l’immunothérapie anti PD-1. Cette demande d’analyse immunohistochimique doit être explicitement mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre ou en cochant la case adéquate. En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. 19
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 20 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10 20
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 21 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117) La recherche de l’expression du récepteur tyrosinas-kinase c-Kit, en immunohistochimie, est un élément diagnostique positif des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST), tumeurs mésenchymateuses caractérisées par des mutations activatrices du proto-oncogène c-Kit. Son expression dans le cadre d’un GIST comporte également un caractère prédictif puisque corrélé à une probabilité de réponse au traitement par thérapie ciblée anti-c-Kit (Imatinib - Glivec ). Il est à noter que certains GIST présentent d’autres types de mutations activatrices, notamment en rapport avec le gène codant pour le récepteur alpha du facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGFRA). En cas de suspicion clinique de tumeur stromale de type GIST, il est demandé au prescripteur de mentionner explicitement sur la demande qu’il souhaite une recherche de l’expression du récepteur c-Kit. En pratique : L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat. Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement. Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR: Professeur M. Delos, 081/42 30 10 Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 21
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 22 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT 4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie La recherche du phénotype MSI dans le cancer colo-rectal La genèse de certains cancers colo-rectaux est liée à une instabilité génétique induite par la défaillance du système de réparation des mésappariements de l’ADN (système MMR ou mysmatch repair) ; les cancers présentant un tel phénotype sont dits MSI (microsatellite instability). 15 à 20 % des cancers colorectaux sporadiques et la quasi-totalité des cancers colorectaux survenant dans le contexte du syndrome de Lynch sont concernés. La connaissance d’un phénotype MSI est prédictive : à stade égal, le pronostic est meilleur que dans le phénotype MSS (microsatellite stability). Elle est aussi thérapeutique, orientant le choix des traitements adjuvants. Les guidelines ESMO recommandent de tester tous les cancers colo-rectaux. La détermination du statut MSI repose sur l’analyse de l’ADN tumoral et sur des colorations immunohistochimiques. Ces recherches doivent être explicitement mentionnées par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de biologie moléculaire proposés. Ces recherches sont confiées en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme. Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire, issues du manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme (version 17 du 16 mai 2017) - la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée : o Instabilité microsatellitaire (MSI) ∞ IHC (expression MLH1, PMS2, MSH2, MSH6) ∞ PCR MSI (analyse accréditée BELAC n°387-MED) ∞ MLH1 méthylation (si MSI positif) (analyse accréditée BELAC n°387-MED) - l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande - toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats -envoi par courrier postal possible ; -aspects pratiques : Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Si le fixateur ou le temps de fixation n’est pas précisé, l’analyse sera effectuée mais le prélèvement sera considéré comme non conforme. 22
Code fichier ANN-QUAL-017 Mise en application V1 : 08/05/2013 Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 23 sur 38 Vérifié par : Caroline Fervaille Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004 Mise en application : 03/01/2018 MANUEL DE PRELEVEMENT Si les blocs et la lame HE de référence sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé. Le matériel confié est renvoyé après analyse. Le résultat fera l’objet d’un compte-rendu additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Le test PCR MSI est réalisé tous les 21 jours, délai de réponse max 1 mois Le test MLH1 méthylation est réalisé tous les 12 jours, délai de réponse max 21 jours Personnes de contact : Pr P. Demetter (02 555 33 35) pieter.demetter@erasme.ulb.ac.be Pr I. Salmon (02 555 31 15) isabelle.salmon@erasme.ulb.ac.be Dr N. D’haene (02 555 53 91) Nicky.D.haene@erasme.ulb.ac.be Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR : Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14 Professeur M. Delos, 081/42 30 10 4.8. Analyses en biologie moléculaire Les analyses de biologie moléculaire sont des analyses spécifiques, confiées en sous-traitance aux Centres qui en ont l’accréditation, la maîtrise, et avec le temps, l’expertise. Elles sont généralement explicitement demandées par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de biologie moléculaire proposés. Le diagnostic de certaines néoplasies (pulmonaires, coliques, mélanomateuses, hématologiques, de tissus mous…) implique le recours à la pathologie moléculaire afin d’évaluer l’éventuelle présence de mutations spécifiques qui ont un impact pronostique et/ou prédictif pour le patient qui en est porteur. La mise au point anatomo-pathologique de certaines lésions du col utérin demande le recours à la biologie moléculaire afin de préciser l’éventuelle présence d’un virus HPV à haut risque. En effet, une infection persistante par un HPV à haut risque entraîne, chez 5% des personnes qui en sont porteuses, le développement d’un carcinome épidermoïde. 23
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