Manuel de prélèvement - Laboratoire d'Anatomie Pathologique - UCL Mont-Godinne
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CHU UCL NAMUR
Manuel de prélèvement
Laboratoire d’Anatomie Pathologique
Version 4
Ce document est la propriété du laboratoire et ne peut être reproduit en entier ou partiellement sans
l’autorisation écrite du directeur du laboratoire.Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 1 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Contenu
1. OBJET ....................................................................................................................................................................3
2. DOMAINE D’APPLICATION ....................................................................................................................................3
3. DEFINITIONS – ABREVIATIONS .............................................................................................................................3
4. LOGIGRAMME – CONTENU ..................................................................................................................................3
4.1. Renseignements administratifs: ...................................................................................................................3
4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique: ........................................................7
4.3. Examen extemporané...................................................................................................................................8
4.4. Examen histologique ....................................................................................................................................8
4.5. Examen cytologique ...................................................................................................................................11
4.6. Analyses immunohistochimiques ...............................................................................................................13
4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein.......................................................................13
4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans le cancer
de l’estomac (et du bas-œsophage) ...................................................................................................................15
4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies pulmonaires .....16
4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires ..................................17
4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires .................................18
4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires ................................19
4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117) ................................21
4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie ............................................................22
4.8. Analyses en biologie moléculaire ...............................................................................................................23
4.8.1 Sous-traitance au Laboratoire d’Anatomie Pathologique des Cliniques Universitaires Saint-Luc à
Woluwé. 24
4.8.2 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie des Cliniques Universitaires Saint Luc à Woluwé ...26
4.8.3 Sous-traitance au laboratoire de Microbiologie Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de
Liège (Unilab Lg). ................................................................................................................................................27
4.8.4 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme. ..................................28
4.8.5 Sous-traitance au laboratoire de l’IPG à Gosselies. ...........................................................................35
4.9. Autopsies ....................................................................................................................................................37
5. INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES ................................................................................................................38
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MANUEL DE PRELEVEMENT
6. ANNEXES .............................................................................................................................................................38
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MANUEL DE PRELEVEMENT
1. OBJET
Le manuel de prélèvement contient toutes les informations relatives aux traitements des échantillons
primaires (prélèvements) ainsi qu’aux conditions de fixation et d’acheminement préconisées pour
garantir un déroulement optimal des analyses.
2. DOMAINE D’APPLICATION
Ce manuel est un document externe mis à la disposition des clients du SAP dans le but de fournir les
informations précises concernant les processus pré-analytiques et ainsi d’obtenir les prélèvements dans
des conditions optimales.
3. DEFINITIONS – ABREVIATIONS
SAP :
Service (laboratoire) d’Anatomie Pathologique.
Prélèvement :
Matériel humain confié au SAP pour réaliser une analyse anatomo-pathologique (macroscopie,
cytologie, histologie, immunohistochimie, immunofluorescence, biologie moléculaire).
EUS :
Echo-endoscopie trans-digestive
EBUS :
Echo-endoscopie trans-bronchique
4. LOGIGRAMME – CONTENU
4.1. Renseignements administratifs:
Laboratoire d’Anatomie Pathologique et de Cytologie du CHU UCL NAMUR
Avenue du Docteur Thérasse, 1
5530 Yvoir
Belgique
Tél : +32 - 81.42.30.12.
Fax : +32 - 81.42.30.16.
Heures d’ouverture :
Le laboratoire est accessible en semaine de 8H00 à 18H.
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MANUEL DE PRELEVEMENT
Un pathologiste est toujours accessible durant les heures ouvrables pour conseiller les
prescripteurs quant aux modalités de prélèvements ou au choix d’analyse à effectuer mais
également pour aider à interpréter le résultat des analyses.
Le laboratoire est fermé le week-end et les jours fériés.
La réception des prélèvements se fait entre 8h et 16h30.
Localisation :
Le service d’Anatomie Pathologique (flèche rouge) se trouve dans un bâtiment non contigu à la
clinique.
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MANUEL DE PRELEVEMENT
Service
d’Anatomie
Pathologique
Numéros de téléphone utiles :
Secrétariat : 081/42-30-12
Fax : 081/42-30-16
Pathologistes :
Professeur Marie-Cécile Nollevaux (Chef de Service):
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MANUEL DE PRELEVEMENT
Secteurs d'ORL, Gynécologie et Urologie
081/42-30-11 marie-cecile.nollevaux@uclouvain.be
Docteur Saro Aghazarian
Secteur de Dinant
081/42-30-84 saro.aghazarian@uclouvain.be
Professeur Monique Delos
Secteur de Gastro-Entérologie
081/42-30-10 monique.delos@uclouvain.be
Docteur Caroline Fervaille :
Secteurs de Dermatologie-chirurgie plastique, Cardio-vasculaire, Hématologie et
Autopsies
081/42-30-14 caroline.fervaille@uclouvain.be
Docteur Claudia Stanciu-Pop :
Secteurs de Cytologie, Sénologie et Pneumologie
081/42-30-34 claudia.stanciupop@uclouvain.be
Types de prélèvements pris en charge par le SAP :
- cytologiques
- histologiques :
biopsies
pièces opératoires
- examens extemporanés
- autopsies
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MANUEL DE PRELEVEMENT
4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique:
Pour être accepté à l’encodage, le prélèvement doit être accompagné d’une demande d’analyse
(ANN-QUAL-015) qui doit comporter les informations suivantes :
1. Identification univoque du patient, à savoir :
a. Nom, prénom
b. Adresse
c. Date de naissance
d. NISS
2. Nom, Prénom, adresse et numéro INAMI du prescripteur
3. Type et origine du prélèvement
4. Tous les échantillons sont identifiés de manière univoque
5. Date de la prescription et signature du prescripteur
6. Renseignements cliniques et exposé du problème
7. Données utiles à l’exécution des prestations et à l’interprétation des résultats,
notamment :
a. La date et l’heure de prélèvement et l’heure de fixation. (Ces informations
permettent d’évaluer le temps de fixation, qui, pour certaines analyses, peut influencer la
nature des résultats.)
b. Le cas échéant, d’éventuelles difficultés lors de la réalisation du prélèvement / de
sa fixation, qui pourraient influencer le résultat de l’analyse
Le formulaire de demande d’analyse est disponible dans l’intranet et sur le site internet du CHU ;
il ne peut en aucun cas y être apporté une modification.
Le prélèvement lui-même est correctement identifié.
L’encodeur du SAP a la responsabilité de vérifier la concordance des informations présentes sur la
demande et le prélèvement (PR-QUAL-005). Toute discordance ou absence d’information conduit
à une procédure de gestion de prélèvement non-conforme (PR-QUAL-006).
Vous comprendrez aisément que certains prélèvements non-conformes aux indications reprises ci-dessus sont
bloquants pour l’analyse alors que d’autres permettent l’analyse sous-réserve (ANN-QUAL-012 ; cette annexe
est disponible dans l’intranet ainsi que sur le site internet du CHU).
En cas de non-conformité bloquante, seule la correction des éléments manquants permettra la réalisation de
l’analyse.
7Code fichier ANN-QUAL-017
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MANUEL DE PRELEVEMENT
Le compte-rendu anatomo-pathologique comportera un descriptif textuel exhaustif de toute non-conformité,
afin d’en assurer la traçabilité.
4.3. Examen extemporané
L’objectif d’un examen extemporané est d’orienter le chirurgien au cours de son intervention afin
qu’il puisse, en fonction du résultat de l’examen extemporané, adapter et éventuellement
modifier le geste chirurgical prévu.
La technique histologique de cet examen est basée sur une coupe en congélation réalisée à l’aide
d’un cryostat. La coupe qui en résulte est de moins bonne qualité qu’une coupe histologique
classique. Le diagnostic devra donc toujours être validé par la lecture du prélèvement après
fixation et enrobage en paraffine.
Une fois le prélèvement reçu (frais !), il faut compter entre 15 et 45 minutes pour que puisse être
transmis un résultat (le délai dépend du nombre de prélèvements extemporanés à prendre en
charge au même moment).
En pratique :
- L’analyse est réalisée uniquement à partir de matériel frais ! Ne pas mettre de sérum
physiologique ni de liquide fixateur
- Acheminer le prélèvement le plus rapidement possible au laboratoire et mentionner sur le
bon de demande « EXTEMPO » et le numéro de téléphone de la salle opératoire.
- Le résultat est transmis par le pathologiste par téléphone dans les 45 minutes maximum
sauf si un nombre important de prélèvements à réaliser en extemporané parviennent
simultanément au laboratoire.
- Après fixation au formol et analyse histologique classique, le résultat de l’examen
extemporané sera intégré au compte rendu final et accessible après validation définitive.
4.4. Examen histologique
Les prélèvements biopsiques et les pièces opératoires relèvent d’une analyse histologique,
associées de façon plus ou moins extensive à une analyse macroscopique. Ces analyses
nécessitent une étape initiale de fixation, permettant de prévenir l’autolyse tissulaire. Seule une
fixation au formol permet la réalisation d’analyses en biologie moléculaire et de techniques
immuno-histochimiques validées.
Les prélèvements doivent être fixés au formol (10% tamponné – équivalent à formaldéhyde 4%).
8Code fichier ANN-QUAL-017
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MANUEL DE PRELEVEMENT
La durée de fixation, pour les biopsies, est de minimum 2 à 6h et de maximum 48h, dans un
volume de fixateur égal à au moins deux fois le volume du prélèvement ; le fixateur doit couvrir
complètement le prélèvement.
Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h.
La durée de fixation, pour les pièces opératoires dépend de la taille du prélèvement. En général,
elle est comprise entre 24 et 48h.
Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h.
CAS PARTICULIER : Les biopsies mammaires et pulmonaires.
Ces prélèvements font fréquemment l’objet d’analyses complémentaires en biologie moléculaire.
Afin de garantir la validité de ces analyses, les biopsies mammaires et pulmonaires doivent être
fixées MINIMUM 6h et MAXIMUM 48h.
En pratique :
- Du lundi au jeudi, les biopsies mammaires et pulmonaires, fixées avant 12h, entament le
jour même de leur réception par le laboratoire le cycle d’inclusion en paraffine. Si le prélèvement
a été fixé après 12h, il entamera le cycle d’inclusion en paraffine le lendemain soir ; le résultat
sera donc différé d’un jour.
- Le vendredi, le prélèvement doit impérativement être réceptionné par le SAP à 16h30 au
plus tard afin de pouvoir débuter le jour même le cycle d’inclusion en paraffine. Tout prélèvement
du vendredi, réceptionné seulement le lundi, fera l’objet d’une non-conformité quant à la durée
de fixation (sur-fixation) et les analyses en biologie moléculaire éventuellement réalisées dans un
second temps seront, soit, non-contributives, soit non validées en termes d’accréditation.
Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est
mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste
référent du domaine.
Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse histologique classique du prélèvement est
transmis par téléphone le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit
réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard).
L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le
logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le
dossier médical du patient (Omnipro).
Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir les comptes-rendus anatomo-
pathologiques de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service
informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Monsieur
Luc Toussaint.
9Code fichier ANN-QUAL-017
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MANUEL DE PRELEVEMENT
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MANUEL DE PRELEVEMENT
4.5. Examen cytologique
L’examen cytologique concerne les prélèvements qui se présentent sous forme liquide ou d’un
étalement. L’examen cytologique fera appel à diverses procédures techniques, spécifiques au
type d’échantillon reçu.
Il est particulièrement important de veiller à l’utilisation des fixateurs et contenants adéquats afin
de permettre une prise en charge optimale de l’échantillon.
Si celui-ci est volumineux (ex : liquide d’ascite), seule une partie du produit est analysée. Si
l’échantillon est peu abondant, tout le matériel est analysé.
a. « Frottis » cervico-vaginaux
Ces prélèvements sont en réalité des brossages mis en suspension (par agitation de la brossette)
par le gynécologue dans un milieu liquide de préservation : Preservcyt®. Les échantillons sont
ensuite traités selon la méthode ThinPrep®. Si une analyse en biologie moléculaire est nécessaire
(typage HPV), le SAP utilise l’échantillon contenu dans ce même flacon, dont une partie seulement
a été utilisée pour l’analyse cytologique initiale.
Les disposables (brossette, flacon de Preservcyt®) sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél
Secrétariat : 081/423012).
La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois.
b. EBUS et EUS
Ces produits de ponction (et éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement) sont
placés dans les tubes fournis à cet effet (tubes coniques à capuchon bleu, renfermant du
Cytolyt®). Ces tubes sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).
c. Liquide pleural, péritonéal
Doit être confié frais au laboratoire, dès que le prélèvement est réalisé. Si le prélèvement est
réalisé hors jours ouvrables, il est préférable de fixer le liquide avec de l’éthanol à 50% (non fourni
par le SAP ; 1 volume d’échantillon pour 1 volume de fixateur, minimum 2 tubes). A défaut, au
minimum placer l’échantillon au frigo.
d. Ponctions de sein, ganglions, cavités intra-articulaires ou organes profonds
Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixées à la
laque, soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et
bouchon bleu, renfermant le milieu Preservcyt® ou Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est
donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).
e. Brossages bronchiques, pancréato-biliaires, œsophagiens
11Code fichier ANN-QUAL-017
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Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Après avoir détaché la brossette qui a été utilisée pour réaliser le prélèvement, celle-ci est agitée
dans le tube à fond conique et bouchon bleu contenant du Cytolyt®. Ce tube est fourni par le SAP
et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).
f. Urines
Le produit des lavages vésicaux est placé dans des flacons contenant de l’éthanol à 50% (un
volume d’alcool pour un volume d’urines). L’éthanol n’est pas fourni par le SAP. Le prélèvement
peut également (en jours ouvrables) être apporté, dès obtention, au laboratoire.
g. Liquide céphalo-rachidien (LCR)
Ces prélèvements doivent parvenir frais, le plus rapidement possible, au laboratoire. A défaut, au
minimum placer l’échantillon au frigo.
h. Lavage bronchique
Les lavages sont placés dans un flacon type biopsie (capuchon rouge) qui renferme du formol 4%
pH neutre.
i. Ponctions de thyroïde
Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixés à la laque,
soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et bouchon
bleu, renfermant le milieu Cytolyt®.
Ce milieu est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat :
081/423012).
En pratique, 2 types de situation se présentent :
- soit nous recevons 2 lames étalées fixées à la laque et 1 tube de rinçage Cytolyt® (qui
contient éventuellement l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement).
- soit nous recevons le produit de ponction injecté et directement rincé dans du Cytolyt®.
Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est
mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste
référent du domaine.
Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse cytologique classique du prélèvement est
transmis par téléphone le jour même ou le lendemain de la réception du prélèvement (pour
autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h au plus tard), selon la procédure technique à
mettre en œuvre pour le type d’échantillon reçu.
L’examen cytologique fait l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre
au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient
(Omnipro).
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Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir le compte-rendu cytologique de
manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU,
afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Madame Sylvie Demoulin.
4.6. Analyses immunohistochimiques
La plupart des analyses immunohistochimiques sont du ressort exclusif du pathologiste qui les
prescrit en fonction des nécessités diagnostiques.
Certaines analyses néanmoins doivent absolument être demandées par le médecin prescripteur
de l’analyse: la recherche d’expression des récepteurs aux œstrogènes et à la progestérone dans
le cadre du cancer du sein, la recherche de sur-expression du récepteur HER2, dans le cadre du
cancer du sein et du cancer du bas œsophage ou de l’estomac, la recherche d’expression du
récepteur EGFR, dans le cadre du cancer pulmonaire non à petites cellules, la recherche
d’expression de ALK dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la recherche
d’expression de ROS-1 dans le cancer pulmonaire non à petites cellules non squameux, la
recherche du récepteur c-Kit, dans le cadre des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal
(GIST).
4.6.1. Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein
L’expression des récepteurs hormonaux (récepteurs des œstrogènes et récepteur de la
progestérone) sont des facteurs prédictifs quant à la réponse au traitement anti-hormonal (par
ex, le tamoxifène). Ils sont recherchés systématiquement pour tout nouveau diagnostic de cancer
mammaire ou après traitement adjuvant, afin de vérifier une éventuelle modification de leur
statut par le traitement.
La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte
également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par
thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie
doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH.
Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la
demande d’analyse qu’il souhaite, si l’échantillon aboutit au diagnostic de néoplasie
mammaire, que soient recherchés les facteurs pronostiques/prédictifs :
- Récepteurs hormonaux ER et PR
- Sur-expression du récepteur HER
13Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
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Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les
tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH
neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai
avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date
et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée
mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est
nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin
prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un
protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement
complémentaire.
Pathologistes référents :
Professeur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11
Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34
4.6.2. Recherche immunohistochimique de la surexpression du récepteur HER2 dans
le cancer de l’estomac (et du bas-œsophage)
La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte
également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par
thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie
doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par ISH.
Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la
demande d’analyse qu’il souhaite, que soit recherché le statut HER2.
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus
(biopsies ou pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée
de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le
plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être
indiquées sur la feuille de demande.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous
ne pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est
nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur
vérifie la fixation adéquate du prélèvement.
15Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
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Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole
additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Pathologistes référents :
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14
4.6.3. Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies
pulmonaires
Dans le cadre du carcinome pulmonaire non à petites cellules est recherchée l’expression de l’EGFR,
un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase, dont l’activation par le ligand, un facteur
de croissance (de type EGF (Epidermal Growth Factor)) promeut la croissance tumorale.
Quoiqu’il n’y ait pas d’évidence que l’expression immunohistochimique de l’EGFR comporte un
caractère prédictif, en Belgique, l’accès au remboursement de la thérapie ciblée par Erlotinib
(Tarceva®), en deuxième ligne, demande une positivité d’au moins 10% des cellules tumorales en
immunohistochimie.
Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de mutation –
cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée par le
prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case
adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire proposés.
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou
pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les
cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre.
La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de
fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus
court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne
pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le
compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation
adéquate du prélèvement.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole
additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Pathologistes référents :
Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
16Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 17 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
4.6.4. Recherche immunohistochimique de ALK dans les néoplasies pulmonaires
Des réarrangements du gène ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase) ont été décrits chez 3 à 5% des
patients porteurs d’un carcinome pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes).
Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations EGFR et KRAS et sont mis en évidence par FISH.
L’analyse FISH conditionne le remboursement d’une thérapie ciblée inhibant la Kinase ALK (ex.
crizotinib).
L’immunohistochime ALK est considérée comme une méthode de screening pour sélectionner les
patients au testing FISH.
Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de
réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement
mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit
en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire
proposés.
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou
pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les
cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre.
La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de
fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus
court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne
pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le
compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation
adéquate du prélèvement.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole
additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Pathologistes référents :
Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
17Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 18 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
4.6.5. Recherche immunohistochimique de ROS1 dans les néoplasies pulmonaires
Des réarrangements du gène ROS1 ont été décrits chez 1 à 3% des patients porteurs d’un cancer
pulmonaire non à petites cellules (surtout adénocarcinomes).
Ils sont mutuellement exclusifs avec les mutations d’EGFR et les réarrangements de ALK.
Un réarrangement de ROS1 serait associé à une réponse thérapeutique au crizotinib.
L’immunohistochimie est à ce jour considérée comme un outil diagnostique potentiel permettant
d’évaluer la présence de la protéine de fusion ROS1.
Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de
réarrangement – cfr infra Point 4.7, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement
mentionnée par le prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre, soit
en cochant la case adéquate dans la liste des tests pharmacodiagnostiques et de biologie moléculaire
proposés.
Cette analyse est confiée en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital
Erasme.
Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire concernant l’analyse sus-mentionnée, issues du
manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme (version 17 du 16 mai 2017)
- la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée ;
o ROS1 expression (IHC), suivi par FISH si positif ;
- l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande ;
-envoi par courrier postal possible ;
Aspects pratiques :
Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant
été préalablement fixés au formol 4% pH neutre.
La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures.
La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.
Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole
anatomo-clinique complet doit être associé.
Le médecin prescripteur vérifiant la fixation adéquate du prélèvement.
Les tests sont réalisés au minimum 1 fois par semaine et le délai de réponse est de 10 jours.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un compte-rendu
additionnel.
Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Personnes de contact :
Dr N. D’haene (02 555 53 91) Nicky.D.haene@erasme.ulb.ac.be
Melle A. Verrellen (02 555 33 35) Audrey.Verrellen@erasme.ulb.ac.be
Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR :
18Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 19 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
4.6.6. Recherche immuno-histochimique du PD-L1 dans les néoplasies pulmonaires
PD-L1 est une protéine transmembranaire exprimée à la surface de certains macrophages ; elle est
induite par des cytokines inflammatoires dans divers tissus. Elle se lie au récepteur PD-1, exprimé à la
surface de cellules immunitaires (lymphocytes T...).
En situation normale, les cellules utilisent l’interaction PD-1/PD-L1 comme mécanisme de protection
contre des réactions auto-immunes en inhibant l’action des lymphocytesT.
Différents types de cancers surexpriment PD-L1 (mélanome, carcinome rénal, carcinome pulmonaire
non à petites cellules...) ; ils échappent ainsi à la réponse immunitaire, inhibant l’activation des
lymphocytes.
Dans ce cadre, l’immunothérapie devient une arme contre le cancer pulmonaire non à petites
cellules. Des anticorps monoclonaux (par ex. pembrolizumab, nivolumab...) bloquent l’interaction
PD-1/PD-L1, et permettent aux lymphocytes T d’être actifs, entrainant une réponse immunitaire
contre les cellules tumorales.
L’immunothérapie anti-PD-1 pembrolizumab a prouvé son efficacité dans le traitement du cancer
pulmonaire non à petites cellules (cancer ESMO 2016), dès la 1ère ligne de traitement. L’expression
de PD-L1 dans plus de 50% des cellules tumorales est associée à une meilleure réponse au
pembrolizumab.
Dès lors, la détection de PD-L1 au niveau des cellules tumorales est un biomarqueur pour la réponse
à l’immunothérapie anti PD-1.
Cette demande d’analyse immunohistochimique doit être explicitement mentionnée par le
prescripteur sur le formulaire de demande d’analyse, soit de manière libre ou en cochant la case
adéquate.
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou
pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les
cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre.
La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de
fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus
court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne
pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le
compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation
adéquate du prélèvement.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole
additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
19Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 20 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR :
Docteur C. Stanciu-Pop, 081/42 30 34
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
20Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 21 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
4.6.7. Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117)
La recherche de l’expression du récepteur tyrosinas-kinase c-Kit, en immunohistochimie, est un
élément diagnostique positif des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST), tumeurs
mésenchymateuses caractérisées par des mutations activatrices du proto-oncogène c-Kit.
Son expression dans le cadre d’un GIST comporte également un caractère prédictif puisque corrélé à
une probabilité de réponse au traitement par thérapie ciblée anti-c-Kit (Imatinib - Glivec ).
Il est à noter que certains GIST présentent d’autres types de mutations activatrices, notamment en
rapport avec le gène codant pour le récepteur alpha du facteur de croissance dérivé des plaquettes
(PDGFRA).
En cas de suspicion clinique de tumeur stromale de type GIST, il est demandé au prescripteur de
mentionner explicitement sur la demande qu’il souhaite une recherche de l’expression du récepteur
c-Kit.
En pratique :
L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou
pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les
cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre.
La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de
fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus
court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.
Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne
pouvons garantir la validité du résultat.
Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le
compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation
adéquate du prélèvement.
Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole
additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR:
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14
21Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 22 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
4.7. Analyses combinées biologie moléculaire et immunohistochimie
La recherche du phénotype MSI dans le cancer colo-rectal
La genèse de certains cancers colo-rectaux est liée à une instabilité génétique induite par la
défaillance du système de réparation des mésappariements de l’ADN (système MMR ou mysmatch
repair) ; les cancers présentant un tel phénotype sont dits MSI (microsatellite instability).
15 à 20 % des cancers colorectaux sporadiques et la quasi-totalité des cancers colorectaux survenant
dans le contexte du syndrome de Lynch sont concernés.
La connaissance d’un phénotype MSI est prédictive : à stade égal, le pronostic est meilleur que dans le
phénotype MSS (microsatellite stability). Elle est aussi thérapeutique, orientant le choix des traitements
adjuvants. Les guidelines ESMO recommandent de tester tous les cancers colo-rectaux.
La détermination du statut MSI repose sur l’analyse de l’ADN tumoral et sur des colorations
immunohistochimiques.
Ces recherches doivent être explicitement mentionnées par le prescripteur sur le formulaire de
demande d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de
biologie moléculaire proposés.
Ces recherches sont confiées en sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital
Erasme.
Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire, issues du manuel de prélèvements de l’hôpital Erasme
(version 17 du 16 mai 2017)
- la demande d’analyse de « biologie moléculaire et immunohistochimie » doit être complétée :
o Instabilité microsatellitaire (MSI)
∞ IHC (expression MLH1, PMS2, MSH2, MSH6)
∞ PCR MSI (analyse accréditée BELAC n°387-MED)
∞ MLH1 méthylation (si MSI positif) (analyse accréditée BELAC n°387-MED)
- l’identification et le nombre de blocs doivent être mentionnés sur la demande
- toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale
des résultats
-envoi par courrier postal possible ;
-aspects pratiques :
Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été
préalablement fixés au formol 4% pH neutre.
La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures.
La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.
Si le fixateur ou le temps de fixation n’est pas précisé, l’analyse sera effectuée mais le prélèvement sera
considéré comme non conforme.
22Code fichier ANN-QUAL-017
Mise en application V1 : 08/05/2013
Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux Page 23 sur 38
Vérifié par : Caroline Fervaille
Approuvé par : Monique Delos VERSION : 004
Mise en application : 03/01/2018
MANUEL DE PRELEVEMENT
Si les blocs et la lame HE de référence sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement
particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé.
Le matériel confié est renvoyé après analyse.
Le résultat fera l’objet d’un compte-rendu additionnel.
Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.
Le test PCR MSI est réalisé tous les 21 jours, délai de réponse max 1 mois
Le test MLH1 méthylation est réalisé tous les 12 jours, délai de réponse max 21 jours
Personnes de contact :
Pr P. Demetter (02 555 33 35) pieter.demetter@erasme.ulb.ac.be
Pr I. Salmon (02 555 31 15) isabelle.salmon@erasme.ulb.ac.be
Dr N. D’haene (02 555 53 91) Nicky.D.haene@erasme.ulb.ac.be
Pathologistes référents au CHU UCL NAMUR :
Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14
Professeur M. Delos, 081/42 30 10
4.8. Analyses en biologie moléculaire
Les analyses de biologie moléculaire sont des analyses spécifiques, confiées en sous-traitance aux
Centres qui en ont l’accréditation, la maîtrise, et avec le temps, l’expertise.
Elles sont généralement explicitement demandées par le prescripteur sur le formulaire de demande
d’analyse, soit de manière libre, soit en cochant la case adéquate dans la liste des tests de biologie
moléculaire proposés.
Le diagnostic de certaines néoplasies (pulmonaires, coliques, mélanomateuses, hématologiques, de
tissus mous…) implique le recours à la pathologie moléculaire afin d’évaluer l’éventuelle présence de
mutations spécifiques qui ont un impact pronostique et/ou prédictif pour le patient qui en est porteur.
La mise au point anatomo-pathologique de certaines lésions du col utérin demande le recours à la
biologie moléculaire afin de préciser l’éventuelle présence d’un virus HPV à haut risque.
En effet, une infection persistante par un HPV à haut risque entraîne, chez 5% des personnes qui en sont
porteuses, le développement d’un carcinome épidermoïde.
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