Apport des iPSC pour l'étude des maladies rares - L. DAVID, Plate-forme iPSC, SFR-SANTE, Nantes
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Apport des iPSC pour l’étude des
maladies rares
L. DAVID, Plate-forme iPSC,
SFR-SANTE, Nantes
1
iPSC: définiEon
hiPS = cellules souches pluripotentes induites.
Autorenouvellement Poten;el de différencia;on en tout type cellulaire du fœtus
« physiologique » (pas placenta)
Nombre de cellules illimitées « Humain dans une boite de culture »
2
La reprogramamEon
1 mois TransfecEon J1-J10 J15-J17 3 mois 2 mois
PréparaEon des Repiquage
J0 AmplificaEon ValidaEon
fibroblastes des clones
Oct4, Klf4, Sox2, Myc
J0 J12
5 min par puits
14/03/2019 Gen2Bio
3
ValidaEon des lignées
1 mois TransfecEon J1-J10 J15-J17 3 mois 2 mois 2-3 ans
PréparaEon des Repiquage
fibroblastes
J0
des clones
AmplificaEon ValidaEon Projet
Oct4, Klf4, Sox2, Myc
J0 J12
De la lignée / Culture
Mycoplasmes
Transgenes
SNP
La pluripotence est une capacité foncEonnelle, pas une signature moléculaire
Différencia;on
4
Mythes et réalités
Effet de l'âge du paEent?
Oui, mais pas un problème
Effet de la source (urine, fibroblastes, PBMC)
Non
Méthode de reprogrammaEon (Sendai, mRNA, Episome)
Non (tendance)
5
UElisaEon des iPSC
6
Exemple: étude d’une maladie
cardiaque héréditaire
Pa(ent reprogramma(on différencia(on
Ø cellules mononucléaires cellules iPS cardiomyocytes
sanguines
Contrôle Ø cellules d'échantilons urinaires
Ins;tut du Thorax, UMR1087, Nantes 7
Une famille avec un syndrome du
QT long
propositus (III.1)
mère (II.2)
état basal
clobuEnol
Ins;tut du Thorax, UMR1087, Nantes 8
Conséquence foncEonnelle de la
mutaEon
Potentiels d'action
Mutated iPS-CMs
Control iPS-CMs
patch-clamp CellOpEq patch-clamp CellOpEq
0
0
Ins;tut du Thorax, UMR1087, Nantes 9
Conséquence foncEonnelle de la
mutaEon
Control iPS-CMs
Mutated iPS-CMs
Ins;tut du Thorax, UMR1087, Nantes 10Exemple: projet MIDRID
Multi-Omics and IPSCs to Improve Diagnosis
of Rare Intellectual Disabilities
Cause de déficience intellectuelle non-idenEfiées par séquençage d’exome
⇒ ReprogrammaEon cellules des paEents
⇒ DifférenciaEon en cellules progénitrices neurales
⇒ IdenEficaEon de défauts
2 lignée générée, 2 lignées en cours, 2 inclusions prévues.
11Les iPSC : un modèle parfait ?
Avantages Inconvénients
- MainEen du patrimoine généEque du - Cellules différenciées immatures
paEent - Analyse in vitro: échelle cellulaire
- ConservaEon de la mutaEon du paEent
- CorrecEon des mutaEons est possible
- Cellules humaines
Les hiPS pour qui, pour quoi ?
Besoin de cellules humaines « physiologiques »
Biologie du développement
Physiopathologie
Criblage pharmacologique
Médecine régénéraEve
12La PFiPSC de Nantes
Lignées humaines 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019
produites par an 1 3 11 14 20 18 14 6 + 6
+ souris, + rat
88 lignées pour 2 échecs
DifférenciaEon CD34+, Cardiomyocyte, NPC/NSC
PublicaEons
Calcul de coûts, modèle économique, personnel en CDI…
13La PFiPSC de Nantes
Laurent David
Resp Scien;fique PFiPSC-DTC
Salle de culture
Marc Grégoire - 7 PSM
Resp Scien;fique Adjoint
- 8 incubateurs
- -80°C, -150°C, -20°C
Caroline Chariau - 4 microscopes
AI, Univ (CDI) - 4 centrifugeuses
Delphine Coulais
IE, INSERM
6eme étage IRSUN
Anne Gaignerie 8 quai moncousu
IE, INSERM
44000 Nantes
Quen;n Francheteau
AI, Univ (CDD)
laurent.david@univ-nantes.fr
pf-ipsc@univ-nantes.fr
Ges;on:
SFR / UMS016 / UMS3556 / CHU
CIC / CHU / INSERM
14Merci, merci !
Philippe Hulin TEAM 2
Audrey Bihouée Paul Barrière
Steven Nedellec
Eric Charpen;er Julie Firmin
Caroline Chariau Audrey Donnart Léa Flippe
Delphine Coulais Richard Redon Thomas Fréour
Quen;n Francheteau Stéphanie Kilens
Anne Gaignerie Ins;tut du Thorax Jenna Lammers
Patricia Lemarchand Flavien Charpen;er Sophie Loubersac
Karim Si-Tayeb SFR-SANTE
Dimitri Meistermann
Aude Derevier Nathalie Gaborit Diego Moreno-Garcia
Morgane Rousselle Arnaud Reigner
Fanny Tantot
FDT20160435459
14/03/2019 Gen2BioVous pouvez aussi lire
