RAPPORT GLOBAL DEFINITIF - IMMUNOHISTOCHIMIE - CD3/Chromogranine/Desmine - Sciensano
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EXPERTISE ET PRESTATIONS DE SERVICE
QUALITE DES LABORATOIRES
COMMISSION D’ANATOMIE PATHOLOGIQUE
GROUPE DE TRAVAIL EEQ
EVALUATION EXTERNE DE LA QUALITE
ANALYSES D’ANATOMIE PATHOLOGIQUE
RAPPORT GLOBAL DEFINITIF
IMMUNOHISTOCHIMIE – CD3/Chromogranine/Desmine
ENQUETE 2020/2
Sciensano/Immunohistochimie/10-FR
Expertise et prestations de service
Qualité des laboratoires
Rue J. Wytsman, 14
1050 Bruxelles | Belgique
www.sciensano.be
ISSN: 2294-3390
GROUPE DE TRAVAIL EEQ
Sciensano
Secrétariat TEL: 02/642.55.21 FAX: 02/642.56.45
Coordinateur TEL: 02/642.52.08
Vanessa Ghislain
d’enquête e-mail: Vanessa.Ghislain@sciensano.be
Coordinateur TEL: 02/642.53.95
Anne Marie Dierick
d’enquête remplaçant e-mail: AnneMarie.Dierick@sciensano.be
Membres groupe de
Institution
travail EEQ
Gabriela Beniuga IPG (Gosselies)
Bart De Wiest OLV (Aalst)
Bart Lelie AZ-ZENO (Knokke-Heist)
Une version provisoire de ce rapport a été transmise aux membres du groupe de travail EEQ le :
16/10/2020.
Ce rapport a été discuté lors de la réunion du groupe de travail EEQ du : /.
Autorisation de diffusion de rapport: Par Vanessa Ghislain, coordinateur d’enquête, le
Vanessa Digitally signed by Vanessa
Ghislain
26/10/2020.
Ghislain Date: 2020.10.26 11:15:30 +01'00'
Tous les rapports sont également consultables sur notre site web:
https://www.wiv-isp.be/QML/Anapath/external_quality/rapports/_fr/rapports.htm
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 2/16TABLE DE MATIERES
1. Introduction ....................................................................................................................................................4
1.1. Objectif de l’EEQ .......................................................................................................................................4
1.2. Activités sous-traitées ................................................................................................................................4
1.3. Matériel de l’EEQ .......................................................................................................................................4
1.4. Demande ...................................................................................................................................................4
1.5. Formulaire de réponse ...............................................................................................................................5
2. Relecture .........................................................................................................................................................5
2.1. Critères généraux ......................................................................................................................................5
2.2. Critères spécifiques par épitope ................................................................................................................5
2.2.1. CD3 ..................................................................................................................................................5
2.2.2. Chromogranine .................................................................................................................................5
2.2.3. Desmine ...........................................................................................................................................6
2.3. Evaluation finale ........................................................................................................................................6
3. Résultats .........................................................................................................................................................6
3.1. Participation à l’EEQ ..................................................................................................................................6
3.2. Aperçu des résultats ..................................................................................................................................7
3.3. Résultats par anticorps ..............................................................................................................................8
3.3.1. CD3 ..................................................................................................................................................8
3.3.2. Chromogranine .................................................................................................................................9
3.3.3. Desmine .........................................................................................................................................10
4. Discussion des résultats .............................................................................................................................10
4.1. CD3..........................................................................................................................................................10
4.2. Chromogranine ........................................................................................................................................11
4.3. Desmine...................................................................................................................................................11
5. Images ...........................................................................................................................................................13
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 3/161. Introduction Ce document comprend un résumé ainsi qu’une discussion des résultats de l’évaluation externe de la qualité (EEQ) Immunohistochimie 2020/2 (CD3/Chromogranine/Desmine) et un résumé des commentaires individuels et des recommandations. 1.1. OBJECTIF DE L’EEQ Cette EEQ avait pour objectif d’évaluer la qualité des colorations immunohistochimiques CD3, chromogranine et desmine. 1.2. ACTIVITÉS SOUS-TRAITÉES Le matériel tissulaire a été fourni par le laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital OLV d’Alost. 1.3. MATÉRIEL DE L’EEQ Le matériel transmis comportait 3 coupes de paraffine non colorées avec des biopsies au trépan provenant des pièces opératoires. Les biopsies comportaient des tissus normaux ainsi que des tumeurs cliniquement pertinentes. Les biopsies ont montré différents niveaux d’expression de protéines (forte, modérée, faible, aucune expression). La coupe CD3 comportait des biopsies avec : 1. Lymphome T 2. Amygdale 3. Appendice La coupe chromogranine comportait des biopsies avec : 1. Uretère 2. Pancréas 3. Côlon : normal et adénocarcinome 4. Vessie, carcinome à petites cellules 5. Thyroïde, carcinome médullaire 6. Tumeur neuroendocrine (carcinoïde) La coupe desmine comportait des biopsies avec : 1. Appendice 2. Placenta 3. Léiomyome 4. Léiomyosarcome L’homogénéité des échantillons a été testée par le laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital OLV d’Alost. L’homogénéité a été vérifiée par contrôle microscopique de la coloration immunohistochimique à plusieurs niveaux (effectuée toutes les 30 coupes). Les échantillons ont été considérés comme homogènes (au sens où chaque entité de 3 coupes renferme une information identique) et stables jusqu’à la fin de la période d’analyse. 1.4. DEMANDE Il était demandé de réaliser les colorations CD3, chromogranine et desmine, selon les procédures habituelles du laboratoire. Le laboratoire pouvait ajouter son propre (coupe de) contrôle (témoin externe). Il était précisé que le traitement des échantillons devait être le même Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020. FORM 43/124/F V13 4/16
que celui des échantillons des patients, c.-à-d. qu’ils devaient être intégrés dans le circuit
habituel des échantillons des patients.
1.5. FORMULAIRE DE RÉPONSE
Il a été demandé de remplir un formulaire de réponse concernant les méthodes utilisées. Ce
formulaire a été établi par le coordinateur d’enquête et a été joint aux lames.
2. Relecture
L’évaluation des lames a été réalisée conjointement et simultanément par 2 pathologistes
externes à Sciensano et par le coordinateur d’enquête, Vanessa Ghislain (Sciensano). Dans
ce but, les évaluateurs se sont réunis à la date du 7 juillet 2020 à l’hôpital universitaire de
Gand. Pour plus d’anonymat, les lames des laboratoires n’étaient pas identifiées par leur
numéro de participant (QMLxxx), mais par un numéro aléatoire uniquement connu du
coordinateur EEQ. Cette structure administrative et scientifique garantit la qualité et
l’anonymat des résultats.
2.1. CRITÈRES GÉNÉRAUX
Globalement, l’évaluation est basée sur :
• la spécificité : un signal suffisant et spécifique doit être présent ;
• le bruit de fond : en principe, une coloration immunohistochimique ne doit pas générer
de bruit de fond aspécifique ;
• la morphologie : la coloration doit modifier le moins possible la morphologie.
2.2. CRITÈRES SPÉCIFIQUES PAR ÉPITOPE
2.2.1. CD3
1) Lymphome T : au minimum une coloration (essentiellement membranaire) modérée de la
majorité des cellules T néoplasiques (contrôle de la sensibilité)
2) Amygdale :
• coloration (essentiellement membranaire) modérée à forte des cellules T des centres
germinatifs et des zones T interfolliculaires
• aucune coloration des cellules B (contrôle de la spécificité)
3) Appendice : coloration (essentiellement membranaire) modérée à forte des cellules T
intra-épithéliales de la muqueuse
Tous les tissus : aucune coloration des autres types de cellules
2.2.2. Chromogranine
1) Uretère : aucune coloration de l’épithélium
2) Pancréas :
• coloration (cytoplasmique) forte des cellules endocrines des îlots de Langerhans
• aucune coloration des cellules exocrines
3) Côlon :
• au minimum une coloration (cytoplasmique) modérée des cellules neuroendocrines de
la muqueuse (contrôle de la sensibilité)
• aucune coloration des cellules néoplasiques (contrôle de la spécificité)
4) Vessie, carcinome à petites cellules : au minimum une coloration (cytoplasmique) faible
à modérée de la majorité des cellules néoplasiques (expression faible : contrôle de la
sensibilité)
5) Thyroïde, carcinome médullaire : au minimum une coloration (cytoplasmique) modérée
de la majorité des cellules néoplasiques
6) Tumeur neuroendocrine (carcinoïde) : coloration (cytoplasmique) forte de la majorité
des cellules néoplasiques
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 5/162.2.3. Desmine
1) Appendice :
• coloration (cytoplasmique) modérée à forte de la majorité des cellules musculaires
lisses de la musculaire muqueuse et de la musculeuse (contrôle de la sensibilité)
• au minimum une coloration (cytoplasmique) faible des myofibroblastes qui entourent
les cellules épithéliales
• aucune coloration des cellules épithéliales (contrôle de la spécificité)
2) Placenta :
• au minimum une coloration (cytoplasmique) faible à modérée de la majorité des
cellules musculaires lisses des vaisseaux
• aucune coloration des cellules cytotrophoblastiques et syncytiotrophoblastiques
3) Léiomyome : coloration (cytoplasmique) modérée à forte de la majorité des cellules
néoplasiques
4) Léiomyosarcome : coloration (cytoplasmique) modérée à forte de la majorité des cellules
néoplasiques
Tous les tissus : au minimum une coloration (cytoplasmique) faible à modérée de la majorité
des cellules musculaires lisses des vaisseaux (contrôle de la sensibilité)
2.3. ÉVALUATION FINALE
A chaque coloration a été attribuée une évaluation finale basée sur les critères* suivants :
• Optimal : coloration parfaite ou quasi parfaite pour tous les tissus
• Bon : coloration suffisante pour tous les tissus ; néanmoins, une optimisation de la
méthode est possible pour améliorer la sensibilité et/ou le ratio signal-bruit de fond
• Borderline : coloration insuffisante, p. ex. coloration globale trop faible ou coloration
faussement négative ou faussement positive pour un des tissus ; une optimisation de
la méthode est nécessaire
• Insuffisant : coloration très insuffisante, p. ex. coloration faussement négative ou
faussement positive pour plusieurs tissus ; une optimisation de la méthode est
nécessaire et urgente
(*) Référence : www.nordiqc.org
3. Résultats
3.1. PARTICIPATION À L’EEQ
Le taux de participation a été de 68/70 (97%).
Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de
laboratoires laboratoires laboratoires laboratoires
Région ayant reçu des ayant renvoyé ayant renvoyé ayant renvoyé
coupes (inscrits) une coupe CD3 une coupe une coupe
chromogranine desmine
Région Flamande 43 41 41 40
Région Bruxelloise 10 10 9 10
Région Wallonne 17 17 17 16
Sociétés pharm. 2 2 1 1
Total 72 70 68 67
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 6/163.2. APERÇU DES RÉSULTATS
Les sociétés pharmaceutiques (fournisseurs des anticorps, voir également 3.1) n’ont pas été
incorporées aux résultats.
Evaluation finale CD3 Chromogranine Desmine
Optimal 53 (79%) 43 (64%) 38 (58%)
Bon 14 (21%) 10 (15%) 11 (17%)
Borderline 0 8 (12%) 7 (11%)
Insuffisant 0 6 (9%) 9 (14%)
Total 67* 67 65*
(*) Un laboratoire a inversé les lames CD3/Desmine.
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 7/163.3. RÉSULTATS PAR ANTICORPS
3.3.1. CD3
Les sociétés pharmaceutiques (fournisseurs des anticorps, voir également 3.1) n’ont pas été
incorporées aux résultats.
CD3
Border- Insuf-
Clone N Fournisseur Optimal Bon Acceptable*
line fisant
Anticorps concentrés (n = 8)
ms LN10 2 Leica/Novocastra 1 1 0 0 2/2
Thermo/Neo-
ml SP7 2 1 1 0 0 2/2
markers
Dako/Agilent
Polyclonal 2 2 0 0 0 2/2
Technologies
Cell Marque/
ml MRQ-39 1 0 1 0 0 1/1
Ventana/Roche
ml non Cell Marque/
1 0 1 0 0 1/1
rapporté Ventana/Roche
Anticorps prêts à l’emploi (n = 58)
Cell Marque/
ml 2GV6 30 27 3 0 0 100%
Ventana/Roche
Dako/Agilent
Polyclonal 25 19 6 0 0 100%
Technologies
ms LN10 2 Leica/Novocastra 2 0 0 0 2/2
ml non Dako/Agilent
1 1 0 0 0 1/1
rapporté Technologies
Prêt à l’emploi et ensuite dilué (n = 1)
Dako/Agilent
Polyclonal 1 0 1 0 0 1/1
Technologies
(*) optimal/bon
ms = anticorps monoclonal de souris
ml = anticorps monoclonal de lapin
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 8/163.3.2. Chromogranine
Les sociétés pharmaceutiques (fournisseurs des anticorps, voir également 3.1) n’ont pas été
incorporées aux résultats.
Chromogranine
Border- Insuf-
Clone N Fournisseur Optimal Bon Acceptable*
line fisant
Anticorps concentrés (n = 23)
Thermo/Neo-
7 4 3 0 0 100%
markers
Cell Marque/
3 2 0 1 0 2/3
Ventana/Roche
3 Sanbio 2 1 0 0 3/3
ms LK2H10
2 HybriTech 2 0 0 0 2/2
1 Bio SB 1 0 0 0 1/1
Dako/Agilent
1 1 0 0 0 1/1
Technologies
1 Invitrogen 0 1 0 0 1/1
Dako/Agilent
ms DAK-A3 3 1 1 1 0 2/3
Technologies
ms LK2H10 Thermo/Neo-
1 1 0 0 0 1/1
+PHE5 markers
Dako/Agilent
Polyclonal 1 1 0 0 0 1/1
Technologies
Anticorps prêts à l’emploi (n = 44)
Cell Marque/
39 28 2 4 5 77%
Ventana/Roche
ms LK2H10
Thermo/Neo-
1 0 1 0 0 1/1
markers
ms 5H7 2 Leica/Novocastra 0 0 1 1 0/2
Dako/Agilent
1 0 0 1 0 0/1
Technologies
Polyclonal
Thermo/Neo-
1 0 1 0 0 1/1
markers
(*) optimal/bon
ms = anticorps monoclonal de souris
ml = anticorps monoclonal de lapin
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 9/163.3.3. Desmine
Les sociétés pharmaceutiques (fournisseurs des anticorps, voir également 3.1) n’ont pas été
incorporées aux résultats.
Desmine
Border- Insuf-
Clone N Fournisseur Optimal Bon Acceptable*
line fisant
Anticorps concentrés (n = 10)
Dako/Agilent
8 5 2 0 1 88%
Technologies
ms D33
Thermo/Neo-
1 0 0 1 0 0/1
markers
ms DE-R-11 1 Leica/Novocastra 1 0 0 0 1/1
Anticorps prêts à l’emploi (n = 55)
Cell Marque/
28 23 4 1 0 96%
ms DE-R-11 Ventana/Roche
2 Leica/Novocastra 1 0 0 1 1/2
Dako/Agilent
24 8 5 5 6 54%
ms D33 Technologies
1 VWR 0 0 0 1 0/1
(*) optimal/bon
ms = anticorps monoclonal de souris
ml = anticorps monoclonal de lapin
4. Discussion des résultats
4.1. CD3
• La coloration CD3 a été de qualité optimale ou bonne pour 67/67 participants (100%) (voir
figure 1).
• La coloration a été réalisée par automate dans 66 laboratoires et manuellement par 1
laboratoire.
• Une coupe de contrôle a été ajoutée par 30/67 participants (45%).
• Les anticorps les plus souvent utilisés sont le clone 2GV6 (30/67 laboratoires soit 45%) et
un anticorps polyclonal (27/67 laboratoires soit 40%).
• Un anticorps concentré a été utilisé par 8/67 laboratoires (12%), un anticorps prêt à l’emploi
par 58/67 laboratoires (87%) (voir figure 2). Un laboratoire a dilué un anticorps prêt à
l’emploi (facteur de dilution 1/2).
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 10/16• Le tissu de contrôle recommandé par NordiQC est l’amygdale : des cellules T des zones
interfolliculaires et des cellules T éparses des zones du manteau et des centres germinatifs
doivent présenter une coloration modérée à forte. Aucune coloration ne doit être observée
dans les cellules B.
4.2. CHROMOGRANINE
• La coloration chromogranine a été de qualité optimale ou bonne pour 53/67 participants
(79%) (voir figure 1).
• La coloration a été réalisée par automate dans 66 laboratoires et manuellement par 1
laboratoire.
• Une coupe de contrôle a été ajoutée par 31/67 participants (46%).
• Le clone le plus souvent utilisé est le LK2H10 (58/67 laboratoires soit 87%).
• Un anticorps concentré a été utilisé par 23/67 laboratoires (34%), un anticorps prêt à
l’emploi par 44/67 laboratoires (66%) (voir figure 3).
• Un résultat inadéquat (borderline ou insuffisant) correspond dans tous les cas (14/14) à
une coloration insuffisante du carcinome de la vessie (= expression faible : contrôle de la
sensibilité), associé ou non à une coloration insuffisante du côlon normal ou du carcinome
de la thyroïde.
• Un prétraitement thermique est essentiel. 7 laboratoires n’ont appliqué aucun
prétraitement et ont tous obtenu un résultat inadéquat (borderline ou insuffisant). Dans
cette enquête, 6 laboratoires ont utilisé un tampon à bas pH (pH6) pour le prétraitement
thermique, dont 50% (3/6 laboratoires) ont obtenu un résultat inadéquat.
• Le tissu de contrôle positif et négatif recommandé par NordiQC est l’appendice : au
minimum une coloration granulaire faible à modérée des axones et des cellules
ganglionnaires des nerfs périphériques doit être présente ; les cellules neuroendocrines
de la muqueuse doivent présenter une coloration forte. Aucune coloration ne doit être
observée dans les entérocytes et les cellules musculaires lisses.
4.3. DESMINE
• La coloration desmine a été de qualité optimale ou bonne pour 49/65 participants (75%)
(voir figure 1).
• La coloration a été réalisée par automate dans 64 laboratoires et manuellement par 1
laboratoire.
• Une coupe de contrôle a été ajoutée par 29/65 participants (45%).
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 11/16• Seuls 2 clones ont été utilisés : le clone D33 (34/65 laboratoires soit 52%) et le DE-R-11
(31/65 laboratoires soit 48%).
• Un anticorps concentré a été utilisé par 10/65 laboratoires (15%), un anticorps prêt à
l’emploi par 55/65 laboratoires (85%) (voir figure 4).
• Un résultat inadéquat (borderline ou insuffisant) correspond dans tous les cas (16/16) à
une coloration insuffisante de l’appendice et/ou du léiomyosarcome et/ou du placenta.
• 14/16 des résultats inadéquats (borderline ou insuffisant) ont été obtenus avec le clone
D33 (anticorps concentré et prèt à l’emploi), dont 11 sur l’automate Dako Omnis. Ceci a
également été rapporté par NordiQC (Assessment Run 48, 2016).
• Le tissu de contrôle positif et négatif recommandé par NordiQC est l’appendice : la majorité
des cellules musculaires lisses de la musculaire muqueuse et de la musculeuse doivent
présenter une coloration modérée à forte ; au minimum une coloration faible à modérée de
la majorité des cellules musculaires lisses des vaisseaux et des myofibroblastes qui
entourent les cellules épitheliales doit être présente. Aucune coloration ne doit être
observée dans les cellules épithéliales.
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 12/165. Images
CD3
Optimal Bon
Lymphome T : au minimum une coloration modérée Lymphome T : coloration peu intense
de la majorité des cellules T néoplasiques
Chromogranine
Optimal Insuffisant
Carcinome de la vessie : au minimum une coloration Carcinome de la vessie : coloration faussement
faible à modérée de la majorité des cellules négative
néoplasiques
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 13/16Optimal Insuffisant
Côlon normal : au minimum une coloration modérée Côlon normal : coloration faussement négative
des cellules neuroendocrines de la muqueuse
Desmine
Optimal Insuffisant
Léiomyosarcome : coloration modérée à forte de la Léiomyosarcome : coloration faussement négative
majorité des cellules néoplasiques
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 14/16Optimal
Appendice : au minimum une coloration faible des myofibroblastes qui
entourent les cellules épithéliales
Borderline
Appendice : coloration globale trop faible
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 15/16Optimaal
Appendice : au minimum une coloration faible à modérée de la majorité
des cellules musculaires lisses des vaisseaux
Borderline
Appendice : coloration des vaisseaux faussement négative
FIN
© Sciensano, Bruxelles 2020.
Ce rapport ne peut pas être reproduit, publié ou distribué sans l’accord de Sciensano. Les résultats
individuels des laboratoires sont confidentiels. Ils ne sont transmis par Sciensano ni à des tiers, ni aux
membres de la Commission, des comités des experts ou du groupe de travail EEQ.
Immunohistochimie, rapport global définitif 2020/2. Date de publication: 26/10/2020.
FORM 43/124/F V13 16/16Vous pouvez aussi lire
